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你分離的血清/血漿外泌體真的干凈嗎?對于血清和血漿等復雜樣本,分離外泌體是十分棘手的。主要原因是血液樣本的成分比較復雜,很容易造成細胞外囊泡的污染。脂蛋白顆粒就是常見細胞外囊泡難以分離的污染物之一。外泌體與脂蛋白的體積、密度十分相近,以至于很多傳統的方法都不能把他們完全分離。1.密度梯度超速離心高密度脂蛋白的密度與細胞外囊泡密度相近,所以它是密度梯度離心主要的污染脂蛋白。低密度脂蛋白雖密度低于EV,但離心的方法還不足以完全將二者分開。因此使用密度梯度超速離心的方式可能無法完全排除脂蛋白污染的可能性。2.分子排阻法(SEC)SEC是根據粒徑大小進行外泌體分離。脂蛋白與外泌體尺寸相近,尤其是極低密度脂蛋白與乳糜微粒。因此,也無法通過分子排阻法將脂蛋白與細胞外囊泡完全分離。3.超速離心法在粒徑和密度相差不大的情況下,顆粒的沉降速度也相差不大。尤其是脂蛋白顆粒數遠超于外泌體時,被稱為金標準的超離法也稍顯不足了。基于此,維思克思推薦選擇磁珠法(WSR0002-2),是基于自主研發的均相液體磁珠,可特異性捕獲外泌體而不吸附雜質,實現高純度外泌體分離。外泌體研究工具小批量試用裝供應,適合前期方法學驗證,降低試錯成本。工程化外泌體廠家直銷

大體積外泌體樣本量分離方法總結大體積外泌體樣本在濃縮后根據不同應用,需銜接不同的外泌體分離方法。維思克思總結出現在常用、簡便、效果比較好的三種方法。SEC重力柱是基于分子排阻色譜原理,根據被分離組分分子大小差異進行外泌體的分離。具有操作簡便、高純度和高回收率等優點,特別適用于大體積樣本中的外泌體分離。分離的外泌體可用于WB分析、NTA或納米流式粒徑分析、電鏡檢測、組學研究、細胞和動物功能研究等。(WSR0003)SEC離心柱是離心柱式的外泌體分離產品,離心柱中裝填的介質能無差別的吸附雜質而不結合外泌體,實現超快速、高收率的外泌體分離。分離的外泌體可用于WB分析、NTA或納米流式粒徑分析、電鏡檢測、組學研究、細胞和動物功能研究等。(WSP0016)磁珠法外泌體分離試劑盒基于自主研發的均相液體磁珠,能特異性捕獲外泌體,實現高純度、高回收率外泌體分離。具有操作簡便、高純度和高回收率等優點,特別適用于血漿、血清等復雜樣本中的外泌體分離。分離的外泌體可用于WB分析、NTA或納米流式粒徑分析、電鏡檢測、組學研究、細胞和動物功能研究等。(WSR0002-2)工程化外泌體廠家直銷外泌體研究工具濃縮型試劑配方,同等實驗需求用量更少,降低長期使用成本。

外泌體研究常見問題解答51.外泌體樣品如何保存?長期保存,置于-80℃。凍存前,離心去除細胞和細胞碎片,再將樣品分裝保存在-80℃。如果條件允許,建議用新鮮樣品進行外泌體的分離和后續實驗。短期保存(1-2天),置于4℃(確保無菌)。2.分離的外泌體如何保存?(1)使用低吸附離心管或凍存管,減少外泌體粘附。(2)對于短期而言,外泌體可以在4°C下儲存長達1周。對于長期儲存,外泌體可以在-20°C或-80°C下儲存。當長期儲存外泌體時,重要的是要考慮它們是否需要多次解凍。如果需要多次應用(因此需要多次解凍)進行分析,我們建議將外泌體懸浮液等分到多個試管中,以便每個試管只經歷一個冷凍/解凍循環。多次凍融循環會對外泌體造成損傷并減少其數量。
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外泌體作為近幾年的“科研新貴”,可謂是紅極一時。由于它們具有獨特的遷移、靶向和選擇性內化進入特定細胞的能力,是非常有前途的遞送載體。然而,目前在外泌體研究和應用上還存在以下痛點:痛點一:由于目前對這些內源性囊泡了解還不夠深入,尤其是在體內行為方面上,將外泌體治zhi療轉診至臨床故而仍為一大難點。體內追蹤外泌體可以提供有關其生物分布、遷移能力、毒性、生物學的重要知識角色,溝通能力和行動機制。痛點二:目前對于胞外囊泡的標記方法有很多種,包括親脂性的染料(如PKH系列、Dil系列),然而這些染料標記方法存在一些不足。維思克思的示蹤探針基于兩項發明**,對比其他染色方法,該探針具有低背景、高效率、強耐酸的優勢!發明名稱:1.一種pH敏感型探針分子及其應用;2.一種探針分子的合成方法。WSR0001-2工作原理為共價方式嵌入外泌體膜結構。當染料結合外泌體膜后,可通過熒光顯微鏡準確觀察到外泌體在細胞內運動與行蹤。突出優勢:特異性高,無背景干擾;標記效率高,該探針以共價的方式嵌入胞外囊泡的雙層膜結構,優于親脂性染料,避免自組裝形成的納米粒子造成信號干擾。在低pH(酸性)條件下也可顯色。外泌體研究工具快速復溶設計,減少實驗準備時間,提升操作便捷性。諾獎Exosome實力廠家
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外泌體表征與定量難在什么地方?又該怎么做?我們拜訪過很多外泌體研究工作者,其中談到多的是外泌體難以分離,分離后的外泌體不好定量,定量的外泌體數據是否準確等問題。2.單一表征方法的局限性對外泌體的純度表征目前采用的是外泌體陰性蛋白標志、顆粒蛋白比。外泌體陰性蛋白標志一般采用WB檢測,屬于定性檢測,與樣本處理、抗體、顯色、曝光時間等多個因素有關,如果作為純度表征的指標,顯然是不合適的。在蛋白聚集體或其他雜質(糖/脂質/核酸等)聚集體/大顆粒較多時,顆粒蛋白比的數值也可能較大,其作為純度表征指標也有其局限性。既然上述外泌體定量方法、表征方法具有其局限性,那么如何科學的對外泌體進行定量和表征呢?工程化外泌體廠家直銷
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