升級(jí)版-外泌體脂質(zhì)定量試劑盒脂質(zhì)是外泌體的主要組成部分，可以測(cè)量外泌體中脂質(zhì)含量來(lái)對(duì)外泌體進(jìn)行定量和質(zhì)量表征！從原理上來(lái)說(shuō)，既然蛋白濃度可以一直作為外泌體定量和表征的重要指標(biāo)。那么用脂質(zhì)來(lái)對(duì)外泌體進(jìn)行定量和表征也是非?？尚械?。升級(jí)版外泌體脂質(zhì)定量試劑盒突出優(yōu)勢(shì)：試劑盒包含獨(dú)特的脂質(zhì)結(jié)合熒光探針，該探針?lè)肿拥臒晒獗尘暗停谂c脂質(zhì)結(jié)合時(shí)發(fā)出明亮的熒光，從而測(cè)量樣品的脂質(zhì)含量。特異性檢測(cè)外泌體脂質(zhì)，該探針只與外泌體脂質(zhì)結(jié)合才能發(fā)光，與其他雜質(zhì)（核酸、蛋白、糖、鹽等）不結(jié)合，可以特異性檢測(cè)外泌體脂質(zhì)。線性范圍廣，靈敏度高，線性范圍：0-1000μg/mL，檢測(cè)靈敏度可達(dá)50μg/mL。重復(fù)性好，CV值低，可以保證脂質(zhì)測(cè)量的準(zhǔn)確性。適用于多種脂質(zhì)類型，外泌體的脂質(zhì)主要是磷脂，本試劑盒可以檢測(cè)到磷脂，用于外泌體定量和表征。同時(shí)也可以檢測(cè)其他多種脂質(zhì)。應(yīng)用范圍：外泌體/LNP脂質(zhì)定量、外泌體表征產(chǎn)品信息：ExosomalLipidQuantificationKit(Fluorometric)（WSR0028-2）外泌體研究工具小批量試用裝供應(yīng)，適合前期方法學(xué)驗(yàn)證，降低試錯(cuò)成本。地黃胞外囊泡應(yīng)用研究

外泌體定量和表征。研究外泌體的同行們（包括我）一直被外泌體的定量和表征所困擾，什么樣的外泌體才是好的外泌體呢？是評(píng)估其活性？純度？蛋白濃度？還是其他什么指標(biāo)？或者說(shuō)我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)時(shí)，怎樣對(duì)外泌體進(jìn)行定量呢？這個(gè)可以說(shuō)是進(jìn)行外泌體實(shí)驗(yàn)的**步，必須確定外泌體的量，才好判斷實(shí)驗(yàn)變量是否影響外泌體的發(fā)生或者確定下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)的給藥劑量。你們是如何進(jìn)行定量的呢？目前的外泌體定量方法有以下幾種，分別是：納米顆粒跟蹤分析（NTA）、納米流式、表面標(biāo)志物的ELISA定量試劑盒、BCA或Bradford蛋白定量試劑盒。注：受認(rèn)知所限，有沒(méi)有涵蓋的，歡迎補(bǔ)充。上述外泌體定量方法中，以BCA蛋白濃度測(cè)定應(yīng)用的廣，也容易得到（也就是可及性很高）。但是，但是我們分離的外泌體，因獲取樣本的不一致，每種樣本中雜蛋白的含量不盡相同，同時(shí)分離方法也不一定相同，這就導(dǎo)致我們很難確定蛋白量與外泌體量的對(duì)應(yīng)關(guān)系。所以，我們這些外泌體研究者就在兩難之間不斷橫跳。為了解決這些困境，維思克思生物科技提供了整套外泌體鑒定技術(shù)服務(wù)、外泌體分離、示蹤、保存、游離染料清qing除、蛋白定量、脂質(zhì)定量、核酸定量等系列產(chǎn)品。高效外泌體供應(yīng)商外泌體研究工具多功能檢測(cè)模塊，一項(xiàng)試劑多指標(biāo)分析，提升性價(jià)比。

外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題解答145.外泌體RT-qPCR實(shí)驗(yàn)是選擇哪個(gè)靶標(biāo)作為內(nèi)參？外泌體沒(méi)有公認(rèn)內(nèi)參，理由如上。常規(guī)內(nèi)參基因在外泌體中表達(dá)量甚至可能比目標(biāo)基因還低。外參是在沒(méi)有合適內(nèi)參的情況下的替代物。miRNA檢測(cè)外參是化學(xué)合成的線蟲(chóng)短片段單鏈RNA(cel-miR-39-3p)在人、小鼠、大鼠中均無(wú)同源片段，比較大限度降低了對(duì)定量實(shí)驗(yàn)造成的干擾。6.外泌體SmallRNA-seq實(shí)驗(yàn)，樣本量有什么要求？腫瘤細(xì)胞系推薦使用40mL以上的初始樣品量。某些細(xì)胞（如懸浮細(xì)胞、干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等）中外泌體含量比較低，建議使用100mL的初始樣品量。一般需提取到10ng以上的TotalRNA，才可以用于SmallRNA-seq實(shí)驗(yàn)。7.如何確保外泌體RT-qPCR和SmallRNA-seq實(shí)驗(yàn)的成功率？為了保證轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)的成功率，建議對(duì)提取的外泌體RNA進(jìn)行質(zhì)控，確保RNA質(zhì)量。如檢測(cè)RNA的濃度、純度和片段分布等，但由于外泌體RNA含量較低，建議使用商業(yè)的外泌體RNA質(zhì)控試劑盒對(duì)RNA質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估。

外泌體樣本量太大怎么辦？外泌體來(lái)源，幾乎所有細(xì)胞都可以分泌外泌體。在科研中，如何處理大體積外泌體樣本是眾多研究者都覺(jué)得十分棘手的問(wèn)題。目前，常用的分離手段包括超速離心法、尺寸排阻法、沉淀法以及免疫親和法。然而這些分離方法要么只適用于小體積微量樣本，要么就是對(duì)儀器要求高、操作復(fù)雜。與各位研究者分享維思克思的大體積樣本處理經(jīng)驗(yàn)，愿能為各位研究者提供思路。1.外泌體濃縮試劑。外泌體濃縮試劑可用于大體積外泌體樣本的處理，可以高通量、快速實(shí)現(xiàn)大體積外泌體樣本（如細(xì)胞培養(yǎng)上清、尿液等）的濃縮，濃縮后的樣本后處理后可進(jìn)行外泌體的分離純化、RNA提取、蛋白提取等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.超濾管超濾。超濾濃縮是一種常用的分離技術(shù)，利用超濾膜對(duì)組分進(jìn)行分離。溶液通過(guò)超濾膜，利用膜孔的大小選擇性，將分子量較大的物質(zhì)過(guò)濾出來(lái)，而將分子量較小的物質(zhì)通過(guò)膜孔。以上大體積外泌體樣本處理工具，維思克思均有提供。外泌體濃縮試劑以及超濾管在處理大體積樣本上具有突出優(yōu)勢(shì)。尤其是外泌體濃縮試劑，操作簡(jiǎn)便，濃縮倍數(shù)高，實(shí)驗(yàn)體驗(yàn)有較好的評(píng)價(jià)，推薦指數(shù)較高。濃縮后的外泌體分離純化，維思克思產(chǎn)品線也非常齊全，包括磁珠法、SEC法等。外泌體研究工具適配多種檢測(cè)設(shè)備，無(wú)需專門的儀器，降低設(shè)備投入。

外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題解答22.外泌體形成的機(jī)制是什么？外泌體通常被描述為通過(guò)多囊泡體與質(zhì)膜融合產(chǎn)生的內(nèi)吞途徑的囊泡，通過(guò)多泡體分泌到細(xì)胞外的小囊泡。它們是細(xì)胞分泌的一個(gè)更大的囊泡家族的一部分，包括微泡、外泌體和脫落顆粒，這些囊泡（除外泌體外）來(lái)源于質(zhì)膜的直接出芽。由于這些實(shí)體的大小、密度和總體組成的相似性存在重疊，使用目前可用的技術(shù)和儀器將其分離是極具挑戰(zhàn)性的。3.外泌體和微囊泡的區(qū)別是什么？外泌體和微囊泡的區(qū)別在于其產(chǎn)生的方式不同。從晚期胞內(nèi)體分泌的細(xì)胞外囊泡稱為外泌體，從細(xì)胞膜直接出芽產(chǎn)生的細(xì)胞外囊泡稱為微囊泡。二者的大小也有所不同，外泌體的粒子直徑約40-100nm，微囊泡的粒子直徑約100-1000nm，但有報(bào)道發(fā)現(xiàn)也存在小直徑的微囊泡，所以無(wú)法從粒子大小來(lái)明確區(qū)分二者。4.外泌體是由什么組成的？外泌體是脂質(zhì)膜包裹的，含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、RNA和其他代謝物的微小囊泡（30–150nm）。外泌體的貨物和表面蛋白可能有很大差異，不同的細(xì)胞類型可以分泌不同的外泌體。外泌體研究工具濃縮型試劑配方，同等實(shí)驗(yàn)需求用量更少，降低長(zhǎng)期使用成本。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體脂質(zhì)組

外泌體研究工具簡(jiǎn)化包裝方案，按需定制規(guī)格，降低包裝物料浪費(fèi)。地黃胞外囊泡應(yīng)用研究

外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題解答35.CD9或CD81等是否對(duì)外泌體起源具有特異性？目前，對(duì)于一般的外泌體標(biāo)記物還沒(méi)有達(dá)成共識(shí)。研究界目前的建議是結(jié)合檢測(cè)許多膜結(jié)合或膜相關(guān)蛋白，以驗(yàn)證膜的存在。靶點(diǎn)CD63和CD81存在于許多不同的外泌體制劑中，CD9也是如此。然而，檢測(cè)到至少2種不同的細(xì)胞系釋放CD9陰性的外泌體（Jurkat細(xì)胞和幾種B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞）。同樣重要的是，通過(guò)對(duì)已知在ER、高爾基體或細(xì)胞核等隔室中表達(dá)的標(biāo)記物進(jìn)行染色，來(lái)證明不存在污染性囊泡。同樣重要的是，用相同的標(biāo)記物來(lái)表征宿主細(xì)胞。6.外泌體中是否包含DNA？一般認(rèn)為外泌體中不包含DNA，或包含少量線粒體DNA。因?yàn)橥饷隗w在胞質(zhì)中形成與包裹貨物，而在胞質(zhì)中存在少量降解的線粒體DNA。目前有一些研究發(fā)現(xiàn)，在外泌體的表面，稱之為“corona”，中文叫“冠“或”暈“，在外泌體分泌到細(xì)胞外后，會(huì)吸附微量的游離DNA。地黃胞外囊泡應(yīng)用研究

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